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技術(shù)文章

被污染的細(xì)胞應(yīng)該如何去除點(diǎn)擊次數(shù):1967 更新時(shí)間:2018-10-22

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價(jià)值不大,宜棄之;在尋找原因后*消毒操作室,復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞,再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

     污染細(xì)胞價(jià)值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除。

1、細(xì)菌和真菌的清除

抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。

預(yù)防用藥一般用雙抗生素,污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時(shí),再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。

2、支原體的清除

(1) 用MRA處理

用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞,每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康,效果好。   

(2) 用清洗純化法清除支原體污染的方法

細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。

其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低限。

如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用,可達(dá)到更好的效果。

(3) 藥物輔助加溫處理

細(xì)胞培養(yǎng)先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí),可殺死支原體,但對(duì)細(xì)胞有不良影響。

(4) 使用支原體特異性血清  

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng),故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個(gè)月后仍為陰性。

但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。

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