流式抗體搭配熒光素原則
流式抗體搭配流式熒光素主要有2個(gè)原則:*,每個(gè)通道只能選擇1種熒光素;第二,各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配,因此需要注意:
1、流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說(shuō)明,Calibur的FL1通道選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC ,或者選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488。Calibur的FL3通道盡管能檢測(cè)PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個(gè)熒光素,但是我們搭配的時(shí)候只能選擇其中1個(gè)。
2、各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配:如果客戶的流式細(xì)胞儀能做4個(gè)通道,在第1個(gè)原則之下,那么每個(gè)通道隨便選出1個(gè)熒光素就可以組合成4個(gè)顏色。以2跟激光的Calibur為例,Calibur各個(gè)熒光素之間可以搭配出16種組合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )+P E(F L 2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 這個(gè)搭配組合可以更改成Alex Fluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等??傊?,在第1原則之下,我們可以隨意搭配和組合各個(gè)熒光素。但是需要注意的是,APC和PE-Cy5一起使用的話,上流式以后,容易導(dǎo)致補(bǔ)償過(guò)度。
所以說(shuō),以上也是流式抗體熒光素搭配的注意事項(xiàng)!